生物等效性試驗分析方法學(xué)評價應(yīng)考慮的幾個方面

生物等效性試驗分析方法學(xué)評價應(yīng)考慮的幾個方面
本文主要從準確度、精密度、靈敏度方法、專屬性、線性范圍、樣本的穩(wěn)定性、方法相關(guān)性等方面提出了對生物等效性試驗分析方法學(xué)評價的一些認識。

    已有國家標準口服制劑的研發(fā)和申請注冊在目前的申報品種中占據(jù)的數(shù)量龐大，該類藥物一般需要與已上市同類品種進行生物等效性比較試驗，作為評價該藥物與已上市品種具有同等內(nèi)在質(zhì)量的一個考量指標。體內(nèi)藥物分析方法學(xué)的評價對判斷其生物等效性試驗結(jié)果的可信性是至關(guān)重要的，現(xiàn)就生物等效性試驗中的分析方法學(xué)評價談一點我們的意見。 測厚儀| 測速儀| 轉(zhuǎn)速表| 壓力表| 壓力計| 真空表| 硬度計| 探傷儀| 電子稱| 熱像儀|
    體內(nèi)藥物分析方法學(xué)的評價應(yīng)主要對以下指標進行考察：
    ：評價測定結(jié)果與真值的符合程度，用回收率表示�；厥章士煞譃榻^對回收率和相對回收率。對不同的實驗?zāi)康�，采用不同的回收率評價指標。
    絕對回收率（又稱提取回收率）考察測定結(jié)果與“真值”的接近程度，從生物樣本基質(zhì)中回收得到目標物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標準品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的絕對回收率。應(yīng)選用高、中、低三種濃度分別進行考察，絕對回收率一般要求在50%~80%。
相對回收率（又稱方法回收率），從生物樣本基質(zhì)中回收得到目標物質(zhì)的響應(yīng)值除以加入到生物基質(zhì)中已知量的標準品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的相對回收率。該評價指標已扣除了目標藥物在樣品的前處理過程損失而造成的系統(tǒng)誤差。高、中濃度點測得的相對回收率應(yīng)在85~115%，低濃度（定量限）應(yīng)在80~120%。
    在血藥濃度監(jiān)測、生物利用度研究、藥代動力學(xué)參數(shù)的確定以及藥物的分布等方面的研究，更關(guān)注的是絕對回收率，而在進行生物等效性研究時更關(guān)注的是相對回收率指標。
    同一均勻樣品多次測定結(jié)果之間的接近程度。精密度可分為以下幾種表述方式。不同的表述方式具有不同的含義。
日內(nèi)（批內(nèi)）精密度：在同一天、同一批樣品或用同一批試劑、同一條標準曲線測得的精密度，考察的是方法的重復(fù)性。
日間（批間）精密度：分析方法在不同時間測定結(jié)果的精密度，考察樣品測定時儀器的性能、試劑、標準曲線、環(huán)境條件等發(fā)生微小變化而導(dǎo)致測定結(jié)果的變異。 
中間精密度：考察隨機變動因素對精密度的影響，如不同的操作人員、不同的儀器等對精密度的影響程度。
復(fù)現(xiàn)性：不同實驗室之間的方法精密度。
    一般要求精密度（RSD） 應(yīng)小于15％，在LOQ 附近的RSD 應(yīng)小于20％。 
    可檢出藥物的最小量。靈敏度可用以下方式表述：
檢測限（LOD）：LOD=3N/S或以空白背景響應(yīng)值的3倍作為估計值
定量限（LOQ）：S/N=10或以空白背景響應(yīng)值的10倍作為估計值。定量限應(yīng)是標準曲線的下限，應(yīng)能滿足測定靈敏度的要求，其準確度應(yīng)在80%~120%，RSD小于20%（n=5）。
最低檢測濃度：LOQ/進樣體積
    上述表達的靈敏度均為儀器的靈敏度，實測樣品的靈敏度還與樣品的取樣量與前處理有關(guān)。
    是考察樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準確、專一地測定分析物的能力。
    1、代謝產(chǎn)物的干擾：可通過多次給藥后的生物樣本進行考察。
    2、內(nèi)源性物質(zhì)的干擾：可通過對生物樣品的凈化處理方法來排除。
    3、其他藥物的干擾：改用具有分離能力或?qū)�屬性強的分析方法�?
    如采用色譜法時，空白試驗是最常用的方法，至少應(yīng)采用6個不同個體的空白試驗樣本進行考察，并提供相應(yīng)的色譜圖，以證實方法的專屬性。
    指一種分析方法的精密度、準確度都符合要求的試驗結(jié)果，而且供試物濃度成線性的變化范圍，一般用標準曲線來描述（注意配制的介質(zhì)）。線性范圍要求覆蓋實測濃度，包括LOQ，上限為最高濃度的120%，下限為最低濃度的80%。（至少6個濃度點）；相關(guān)系數(shù)γ不低于0.99，同時符合準確度和精度度要求（偏差小于15%，最低點的偏差小于20%）。評價時還應(yīng)注意標準曲線的截距與鈄率的關(guān)系：截距過大，可能是有干擾成分或者是線性范圍設(shè)置過寬。
        1、短期室溫穩(wěn)定性：要求高、低濃度樣本在4~24 h內(nèi)穩(wěn)定�？疾鞙囟取⒐庹�、空氣、酶解等因素。
    2、長期低溫條件下的穩(wěn)定性：從第一個樣本采集至最后一個樣本的分析為一個考察時間周期，貯存溫度一般為-20℃ ，如果需要也可在-70℃貯存。要求高、低濃度至少分別測定3次，測得結(jié)果與第一天測得的相應(yīng)濃度比較應(yīng)保持穩(wěn)定。
    3、凍融試驗：取高、低濃度各3份于-20℃貯存24小時，取出后在室溫自然解凍，取樣測定，然后再將樣品放回冷凍12~24小時，如此重復(fù)循環(huán)二次以上，分別比較各次測定結(jié)果。 
    4、對照液和內(nèi)標液的穩(wěn)定性：室溫考察6小時穩(wěn)定性，然后冷藏7~14天或恰當?shù)闹芷诤筮M行測定，與新配溶液的測定結(jié)果進行比較。
    對同一種樣品，用已證明有相當專屬性的分析方法與新建立的分析方法同時進行測定，比較兩種分析方法測得結(jié)果的相關(guān)程度。通常用相關(guān)系數(shù)γ 表示，一般要求兩種方法的相關(guān)系數(shù)γ 在0.95以上。
    以上是我們對生物等效性試驗分析方法學(xué)評價方面的一些認識，希望對進行此方面工作的人員有所幫助。